Diabetologia：介导但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次浮现人体内自身免疫球蛋白到浮现1型式肾病临床研究病症的方面不下在儿童中后期就有良好的详细描述，多个人体内自身免疫球蛋白特征性的儿童里有70%在胰岛素叠加后10年中复发肾病，而随访15年的儿童这一数量减低到84%。相对来说于之下，占临床研究1型式肾病一半以上的型式1型式肾病的发作功能还无法得到充分的数据分析。

愈加多的人开始运用于依此管理系统来定义1型式肾病的方面：有机体在浮现多种人体内自身免疫球蛋白时踏入第1之前，浮现血糖异常时踏入第2之前，浮现病症时踏入第3之前。一些多发人体内自身免疫球蛋白特征性的有机体，在1期和2期，方面很慢，并发展为发作的1型式肾病。我们之前详细描述了一第三组在首次检查到多种人体内自身免疫球蛋白检测后至较少10年无肾病的正因如此慢方面者，这第三组病变总数较少，但相似性非常确实。随后，我们见到人体内自身特异性特异性CD8+T细胞膜质子化在方面减慢的病变里原则上不长期存在，但在近期发作和长期长期存在的肾病病变里很容易检查到。这似乎表明，与方面病变相对来说于，这些病变自身免疫球蛋白的恒定增强。

早期数据分析表明，尽管恒定性T细胞膜(Treg)数量短星期，但肾病病变长期存在一些功能缺陷，其里包括对IL-2的质子化能力减缓。此外，肾病病变里的震荡CD4+T细胞膜似乎对恒定越来越具抵抗性，发挥为震荡T细胞膜的选择性减慢，自然诱发的Treg和体外诱发的诱发Treg，以及特异性经历的CD4+T细胞膜里IL-2质子化减慢。本数据分析的目的是详细描述了CD4+恒定性T细胞膜(Treg)在海岸边正因如此减慢方面者里的相似性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访星期为18-32年。

作法：BOX数据分析是一项以人群为基础的纵向数据分析，在21岁下述确诊的病变亲人里检查1型式肾病的危险性因素。我们之前详细描述了长期减慢方面者的相似性，他们保持一致多重人体内自身免疫球蛋白特征性多达10年，但无法浮现肾病的临床研究病症，慢性或非展开性自身免疫。随后，10名之后保持一致无肾病并愿意给予大量血液检测的减慢方面者纳入T和B细胞膜功能归纳。在目前的数据分析里，8名慢方面者(SP第三组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的人体内自身免疫球蛋白特征性。所有的自发性都受制于1型式肾病方面的1期，尽管一些人随后失去了人体内自身免疫球蛋白对某些特异性的特征性质子化，然而，一名病变之前受制于2期至较少6年，但无法浮现临床研究病症，一名病变被诊断为肾病，该实验者72岁，在采自实验检测时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳里对该酪氨酸展开了实质上评估。分立外周血单个核细胞膜(PBMCs)，采用多匹配流式细胞膜术和T细胞膜选择性飞行测试评估酪氨酸里Treg的kHz、基因型式和功能。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、密切涉及和复归)展开无监督聚类归纳，评估Treg基因型式。

结果：与生活命品质酪氨酸相对来说于，来自慢方面体的知觉CD4+T细胞膜的监督聚类说明了，激活命的知觉CD4+ TregkHz减低，与糖皮质激素诱发的TNFR涉及蛋白(GITR)传达减低有关。一名HbA1c升高的病变与方面减慢者和意味着的对照第三组相对来说于，Treg著者有所并不相同。功能归纳表明，与生活命品质酪氨酸相对来说于，来自减慢方面体的Treg介导的CD4+震荡T细胞膜选择性明显受损。发挥为对震荡CD4+T细胞膜CD25和CD134传达的选择性减低。

由此可知1 深入的基因型式归纳说明了，CD4+TregHIV-式在慢方面字段里减低。由FlowSOM叠加成的Treg一楼，聚集在来自所有酪氨酸的活命CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标识物传达鉴定出10个元簇:知觉T细胞膜_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T细胞膜;HLA-DR + GITR +知觉T细胞膜;线程Treg_1;线程Treg_2;线程Treg_3;和线程Treg_4。(a)运用于9个并不相同Treg标识叠加成的10个元簇的MST。每个路由器值得一提的是一个坦克部队(100个坦克部队)，越来越大的元坦克部队(10个元坦克部队)在路由器第三组周边成品。每个路由器里的饼由此可知说明单个标识的传达档次。(b)每个元聚类的热由此可知，以说明了主体标识传达。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)叠加成由此可知，以及FlowSOM比对的每个元簇的沙质。(e-l)相对来说稀土元素为每个metacluster装该点阵由此可知(稀土元素> 0.05%)断定为HD和SP第三组:线程Treg_2 (e),线程Treg_3 (f),线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T细胞膜(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T细胞膜(l)。黄色边框值得一提的是捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对大写秩检测。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 运用于CITRUS的预测模型式证实，TregkHz的减低是方面减慢的标记。分级制度介导(a - f)和柑橘归纳(g-k)相对SP自发性和意味着的HD自发性在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l人群的特色由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达展开分立，模拟FlowSOM人群。(b) HD(白斑)和SP(白斑)第三组以及酪氨酸SP 606(黄色)里CD25+ cd127的kHz核心内容由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+介导可数的装该点阵由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线程T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度着色，箭头引人注目的簇被比对为SP和HD字段两者之间的并不相同。(j)装该点阵由此可知说明了了在SP(白斑)和HD(灰点)第三组里，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相对来说稀土元素(数量)。(k)由此可知表说明了每个簇的基因型式(粉红色)和Treg标识相对来说传达与历史背景传达(白色);上列，线程Treg_3;示意图偷偷地，线程Treg_4。历史背景与所有其他簇里标识的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对大写秩检测

由此可知3 与生活命品质献血者相对来说于，方面减慢者知觉treg的GITR减低。每个知觉CD4+T细胞膜元簇(知觉T细胞膜_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T细胞膜;HLA-DR + GITR +知觉T细胞膜;线程Treg_2;线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个传达标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的传达热由此可知(sp606不包括在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR传达相联，说明了由此可知表(c)和核心内容由此可知(d)。Wilcoxon配对大写秩和检测，p< 0.07(黄色)所有酪氨酸包括，p< 0.05(白色)酪氨酸SP 606和意味着的HD不包括在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR传达，从分级制度介导，从所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(黄色)相联，说明了由此可知表(e)和核心内容由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对大写秩检测

由此可知4 来自减慢方面的CD4+ treg细胞膜遏制震荡CD4+T细胞膜的能力减缓。SP第三组用白色的该线和边框说明，HD第三组用黑色的该线和边框说明，黄色的该线/边框说明酪氨酸sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜展开分选。CD4+CD25−(此番者)被标识为CFSE, Treg按观察的数量滴定。用抗CD3 /28微珠再造细胞膜，培训3几天后展开流式细胞膜术检查。(a-d)与CD4+此番者相对来说可不的treg培训(complex)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培训。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE选择性多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性多于。运用于特征性对照(激活命的响可不细胞膜分别为treg)计算选择性多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对测试

由此可知5 震荡CD4+T细胞膜对减慢方面的T细胞膜再造的选择性越来越引人注目。SP第三组用白色的该线和边框说明，HD第三组用黑色的该线和边框说明，黄色的该线/边框说明酪氨酸sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜展开分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标识，treg按观察的数量滴定。用抗CD3 /28微珠再造细胞膜，培训3几天后展开流式细胞膜术(CD25反染)和细胞膜因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606此番者协力培训。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE选择性百分不下(b)。(c,d) CD25选择性百分不下(c)和CD134选择性百分不下(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训里的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对测试

结论：我们给出的结论是，来自减慢方面子的再造知觉CD4+Treg在GITR传达里得到了适配和珍贵，强调了进一步数据分析Treg在1型式肾病效用有机体里的举例来说的前提。

出处出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28